cDNA文库是指某生物某发育时期所转录的全部mRNA经反转录形成的cDNA片段与某种载体连接而形成的克隆的集合。
标准cDNA文库构建的基本原理是用Oligo(dT)作逆转录引物,或者用随机引物,给所合成的cDNA加上适当的连接接头,连接到适当的载体中获得文库。
文库构建流程:
1.样品QC
2.从总RNA中分离mRNA(原始文库将采用至少2µgmRNA进行构建)
3.以带有NotI酶切位点的oligo(dT)LinkerPrimer为反转录引物,再在双链cDNA的5’端加SalIIadaptor
4.NotI酶切、过柱去除小片段
5.将合成的双链cDNA与载体进行连接,连接产物转化DH10B感受态细胞
6.cDNA文库的QC:检测库容量(重组子克隆数目);随机挑取30个克隆子进行PCR鉴定和双向测序分析,检测含插入片段的克隆子比例,检测平均插入片段大小
客户提供
注明样品的种属,收集样品后,应将样品立即置于干冰保持低温运输。
我们提供
含有文库的甘油菌和质量分析鉴定报告
质量保证
文库含有至少4x106个原始克隆
样品平均插入片断保证大于1.0kb
有超过85的载体含有插入片段
cDNA文库构建
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